逆轉錄實(shí)驗優(yōu)化及注意事項

日期:2024-07-08 02:18
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摘要: 逆轉錄(reverse transcription)是以 RNA 為模板合成 DNA 的過(guò)程,即 RNA 指導下的 DNA 合成。優(yōu)化及注意事項: 1、逆轉錄 PCR 時(shí),提取 RNA 是關(guān)鍵,需分離高質(zhì)量 RNA(純度和完整性)。 2、整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。 3、 逆轉錄過(guò)程中要謹防 RNA 酶的污染,加入 RNA 酶抑制劑。 4、 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照。 5、逆轉錄實(shí)驗應全程在冰上操作完成,操作過(guò)程應避免 RNase 污染。 6、 提高...

逆轉錄(reverse transcription)是以 RNA 為模板合成 DNA 的過(guò)程,即 RNA 指導下的 DNA 合成。優(yōu)化及注意事項:

1、逆轉錄 PCR 時(shí),提取 RNA 是關(guān)鍵,需分離高質(zhì)量 RNA(純度和完整性)。


2、整個(gè)操作過(guò)程需使用去 RNA 酶的槍頭、EP 管等耗材。


3、 逆轉錄過(guò)程中要謹防 RNA 酶的污染,加入 RNA 酶抑制劑。


4、 為了防止非特異性擴增,必須設陰性對照。


5、逆轉錄實(shí)驗應全程在冰上操作完成,操作過(guò)程應避免 RNase 污染。


6、 提高逆轉錄預熱溫度(也可根據相應逆轉錄試劑盒進(jìn)行調整)。


7、 減少基因組 DNA 污染,可使用去基因組的逆轉錄試劑盒。